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食用菌（平菇）母種（一級(jí)種）的制作

作者： [成群]　　文章來源： [食用菌研究中心]　　點(diǎn)擊數(shù)：[6436]　　更新時(shí)間：[2011-12-14]

一、通過母種（一級(jí)種）的制作，培養(yǎng)基制備，無菌操作，組織分離方法等技術(shù)。

二．微生物的營(yíng)養(yǎng)需要多種原料，根據(jù)需要選擇合適的營(yíng)養(yǎng)成分配制成培養(yǎng)基，并調(diào)節(jié)適宜的PH。菌種的培養(yǎng)是食用菌生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，可采用子實(shí)體接種，在無菌培養(yǎng)基上，通過無菌操作，恒溫培養(yǎng)而獲得

三．材料用具

高壓滅菌鍋、恒溫箱、試管或錐形瓶或燒杯、、1厘米厚小木條、電爐、大號(hào)燒杯、長(zhǎng)玻棒、小刀、接種鏟、鋼鍋、長(zhǎng)鑷子、酒精燈、霧化消毒粉等

土豆、瓊脂、葡萄糖 、新鮮平菇子實(shí)體、水

四、方法與步驟

（一）母種培養(yǎng)基制作

l．采用的培養(yǎng)基配方 ：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）馬鈴薯(去皮)200mg，葡萄糖20.0g，瓊脂2.0g，水l000mL。

2．培養(yǎng)基制作：馬鈴薯去皮、去眼，切成薄片，稱200克放入鍋中，煮至熟而不爛，四層紗布過濾，加入瓊脂小火攪拌至全部溶化，補(bǔ)足水分后加糖。

３、分裝：溶解后趁熱分裝到試管中，約占1/5，塞上棉塞。或分裝到小錐形瓶中在最寬處，塞上棉塞。分裝時(shí)應(yīng)注意不要將培養(yǎng)液沾到試管管口，避免將來發(fā)生污染。若有沾粘，則應(yīng)用干凈紗布及時(shí)擦凈。分裝的試管直接加棉花塞封口，棉花應(yīng)用普通棉花，不能用脫脂棉，棉花塞起到過濾空氣的作用，不宜過松或過緊，以封口后手持棉塞輕輕搖動(dòng)試管不脫落，且旋轉(zhuǎn)撥出順利為度。棉塞外觀要求光滑，不能塞過淺或過深，否則造成操作困難。

滅菌時(shí)將試管扎成捆，用牛皮紙或其它防潮紙將整捆試管的棉塞包好，直接放入底部盛水的高壓滅菌鍋內(nèi)，加熱滅菌４５分鐘。

４、培養(yǎng)基滅菌

按滅菌鍋操作指南操作。特別注意：內(nèi)鍋保持干燥，外鍋加開水淹過支架，兩兩對(duì)稱加蓋。０.０５ＭＰ時(shí)放出冷氣，再加壓至０.１ＭＰ維持壓力４５分鐘。滅菌鍋無恒壓控制時(shí)要人工控制熱源。我們是不斷切斷電源控制。

待壓力降至０后，打開鍋，稍待片刻再取出，以保證干燥。

５、擱置斜面

將試管放在木條上擱置斜面，使之自然冷卻，凝固成斜面，斜面為試管長(zhǎng)的1/2，冷卻后即成斜面培養(yǎng)基。

（二）接種

（1）接種箱內(nèi)用氣霧消毒１５分鐘，將待接的斜面試管以及新鮮干平菇子實(shí)體、接種針等放入已消毒的接種箱內(nèi)。

（2）用75%的酒精溶液棉球擦雙手、小刀片及子實(shí)體消毒。點(diǎn)燃酒精燈。

（3）左手持住空白斜面試管，右手夾持棉塞，火焰封口。

 

（4）刀取黃豆大小的菌蓋內(nèi)部白色菌絲，迅速移接到空白斜面中央，將棉塞塞回試管。

（三）．培養(yǎng)

將已接種好的試管放入恒溫培養(yǎng)箱，在22～26℃下培養(yǎng)　８-１０天，菌絲長(zhǎng)滿試管即為一級(jí)種（母種）。

五、菌絲的挑選

１.白色菌絲均勻布滿培養(yǎng)基面為最好。

２.個(gè)別菌絲生長(zhǎng)不豐滿，可能與接種時(shí)組織塊的擺放位置有關(guān)。

３.不足的分析：

培養(yǎng)基管壁有水珠，可能配置時(shí)水分稍多或外界氣溫過低（２^ＯＣ）有關(guān)。

試管培養(yǎng)基量多，造成斜面不夠長(zhǎng)。